细胞复苏的成功与否与冻存及复苏操作密切相关。上周，我们分享了细胞冻存中常见的错误细节，详见《细胞复苏失败原因分析——冻存篇》。本篇将重点从复苏的角度分析，识别复苏过程中可能出现的问题。

首先，我们来回顾一下细胞复苏的标准步骤：
1. 提前将水浴锅预热至37℃，并对培养基进行复温，同时设置离心机的转速；
2. 准备一个15ml的离心管，并添加适量的培养基；
3. 取出冻存管，浸入水浴锅中，快速摇晃使细胞在2分钟内充分融化；
4. 将细胞悬液缓慢滴入已经加入培养基的离心管中，进行1000rpm离心3分钟；
5. 弃去上清液，重悬细胞并接种至培养器皿中，最后放入培养箱。

以下是细胞复苏中常见的错误操作：
1. 如果液氮或冰箱离水浴锅较远，未采取保冷措施，细胞可能在运输过程中开始融化（特别是在夏季），冻存细胞应放在干冰或冰盒中运输至水浴锅。
2. 在运输冻存管时，请勿用手直接触摸细胞部分或将其放入口袋。应捏住管盖或放置于容器中，避免局部温度升高导致细胞开始融化。
3. 不要用手搓热融化细胞，手心的温度不足，且热量分布不均，可能导致细胞死亡。
4. 在水浴中未严格控制时间，直接放入水中静置，未进行充分晃动，不能有效促进细胞融化。复苏时应遵循“快融”原则，建议在2分钟内完成细胞完全融化。
5. 水浴结束时管内若仍有较大的冰块未融化，这会导致细胞死亡。冰块中的细胞升温缓慢，死亡风险增加，并可能对已融化的细胞造成低温损伤。
6. 细胞融化后未离心去除DMSO，有些同学在复苏后直接用10倍培养基稀释，而不进行离心。虽然这种方法在某些贴壁细胞中可行，但对于敏感的悬浮细胞则不适用，DMSO对细胞有毒性，因此建议离心去除上清液，以确保细胞存活。

以上内容是根据小尚多年的经验总结，结合冻存篇的知识，基本解决了复苏失败的所有问题。如果您还有其他未提及的知识点，欢迎在评论区补充。同时，提到细胞复苏的安全与有效性，我们需要强调的是，选择可靠的品牌对于细胞培养至关重要。金年会金字招牌诚信至上，在产品和服务上保持诚信，能够为您的细胞实验提供更好的保障。