金年会金字招牌诚信至上提供RFL-6大鼠成纤维细胞的培养说明，旨在帮助研究人员有效培养和管理细胞。以下是详细的细胞培养过程和注意事项。

一、细胞培养条件

细胞名称：RFL-6大鼠成纤维细胞
生长特性：贴壁生长
冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：采用DMEM培养基，添加10% FBS和1% 双抗。
传代方法：初次建议1:2进行传代。
备注：使用无菌离心管收集培养基，以进行对比培养。如对比效果不理想，建议直接使用我们的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

在细胞达到稳定状态后，填满完全培养液并封紧瓶口是运输细胞的最佳方法。接收细胞时，需用75%酒精喷洒整个细胞瓶，消毒后置于超净台内严格进行无菌操作。随后，将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱，静置3-4小时以稳定细胞状态，再进行后续处理。显微镜下观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存（建议40x, 100x, 200x各一张）。前三天的照片将作为重要售后依据，若未提供照片默认细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，收集培养液至离心管中，保留5ml培养基在37℃、5% CO2孵箱中继续培养。若细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁的PBS冲洗细胞1-2次。
2. 添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶至培养瓶，加热至37℃消化1-2分钟，观察细胞是否变圆并脱落，快速返回操作台轻敲培养瓶，加入超出5ml的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管，1000 RPM下离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 根据1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

在细胞覆盖80%培养瓶面积时，丢弃培养液并用PBS清洗一次；添加约1ml的0.25%胰蛋白酶，查看细胞回缩变圆后加入5ml完全培养基终止消化，再轻轻吹打脱落细胞。转移悬液至15ml离心管并在1000 RPM下离心5分钟；弃去上清，加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管。最终将冻存细胞放入-80℃冰箱，若需转入液氮罐，需在-80℃冰箱存放24小时以上。

c. 细胞复苏

从液氮中取出冻存管（请佩戴防护面具），迅速放入37℃水浴解冻，直至无结晶后用75%酒精擦拭外壁。将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管，1000 RPM离心5分钟；弃去上清，重悬细胞于5ml完全培养基，接种至T25培养瓶并放于37℃、5% CO2培养箱中。第二天更换新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

部分细胞在运输过程中可能易脱落，属正常现象。如脱落较多，可将培养液收集于离心管中，离心后补充胰酶进行处理，重悬后按1:2比例分瓶传代，补充新完全培养基。确保细胞在适宜条件下培养，以获得最佳生长效果。

五、售后条款

关于细胞问题的重发情况：
1）运输中出现问题（如细胞丢失、瓶身破损等）均可重发；
2）收到细胞48小时内出现污染问题，需提供真实实验结果后可重发；
3）细胞静置或复苏后存活率未达标的情况需提供状态照片，确认为我方责任则可重发。
4）细胞状态不良且未提供前3天照片的情形、因非建议方法操作导致的细胞问题通常不支持重发。
请根据具体情况进行核查和协商处理。
金年会金字招牌诚信至上，致力于为科研提供优质服务。