原代细胞培养是指在从机体直接取出细胞、组织或器官后，立即进行的细胞培养。因此，严格意义上来说，此过程指的是在细胞成功传代之前的阶段，此时细胞保留了其基本特性，特别是正常细胞仍然保持二倍体数量。原代细胞能够真实反映特定细胞在体内的生理状态。然而，原代细胞通常在传代次数较少后会停止增殖并死亡，限制了在需要大量细胞的实验，如生化分解、遗传筛选等中的应用。基于此，在体外建立永生细胞以研究细胞生长、分化及衰老变得尤为重要。本文将简要介绍中乔新舟在原代细胞培养及建立永生细胞系的方法。

### 方案一：SV40LargeT介导的细胞永生化

许多病毒基因能够影响细胞周期，目前常用的永生化方法是使用SV40T抗原。SV40T抗原已被众多细胞验证为细胞永生化最简单有效的试剂，其工作机制相对容易理解。SV40（simian virus 40）是源自猿猴肾细胞的病毒，编码了两种主要的肿瘤抗原：大T抗原和小T抗原。大T抗原对于细胞转化的启动及持续维持表型是必需的，而小T抗原虽然不是必需，但可以增强作用。然而，SV40LargeT的使用也伴随着潜在的致癌风险，可能导致细胞的恶性转化。

### 方案二：hTERT介导的细胞永生化

端粒中含有一种逆转录酶（TERT），能够催化端粒酶的反转录，合成端粒DNA，进而不断维持染色体末端的端粒长度，使细胞持续生长。正常细胞中通常不表达TERT，因此需要使用转基因技术构建表达载体，将TERT转染入细胞中。为了使原代细胞获得永生化并保持正常生理特性，我们可以通过转染人端粒酶逆转录酶cDNA（hTERT）来激活端粒酶活性，维护端粒长度，进而诱导细胞永生化。这种方法在高传代数和使用致癌基因时，能更忠实地反映体内正常细胞的生理特性。

### 方案三：复合病毒感染介导的细胞永生化

对于某些细胞类型，仅使用单一永生化方法可能无法成功。因此，根据细胞系的不同，结合抑制细胞周期与hTERT的表达，可以更有效地实现细胞的永生化。这一过程涉及到复合病毒感染，通过慢病毒转染SV40T及hTERT基因，综合了前两种方法的优缺点，保持了原有细胞特性，避免了核型变异。

中乔新舟提供了众多的人源及动物源的永生细胞株，以及丰富的永生细胞培养基，供科研工作者选择。强大的技术支持及产品线使得金年会金字招牌诚信至上的理念在生物医疗领域得以展现。

### 永生化细胞的应用领域

1. **药物筛选与开发**：永生化细胞是药物筛选与毒性测试的理想模型，能够快速、大规模评估药物的有效性与安全性。

2. **基因研究与功能验证**：由于这些细胞能长期增殖，成为研究基因功能及细胞信号通路的重要工具，尤其在基因表达调控与癌症研究中。

3. **癌症研究**：众多永生化细胞系源于癌细胞，其永生化特性为研究癌症的发生、发展及治疗提供了关键模型，助力科学家深入了解癌症的生物机制。

4. **抗体生产**：如CHO细胞等永生化细胞常被广泛用于单克隆抗体和重组蛋白的生产，对生物药物的发展具有重要意义。

中乔新舟不断推动技术创新，以保证高品质的产品与服务，恪守金年会金字招牌诚信至上的原则，支持生物医疗研究的不断进步。