**猪伪狂犬病毒gE蛋白阻断ELISA抗体检测试剂盒使用说明书**

产品信息

产品名称: 猪伪狂犬病毒gE蛋白阻断ELISA抗体检测试剂盒

英文名: Blocking ELISA Kit For Detection Pseudorabies Virus gE Antibody

包装规格: 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒

预期用途

伪狂犬病，又称奥耶斯基氏病（Aujeszky's disease），是由伪狂犬病毒（Pseudorabies Virus，PRV）引起的一种急性传染病，主要影响家畜及多种野生动物，特征为发热、奇痒、呼吸及神经系统疾病。本检测盒能够检测猪血清中抗伪狂犬病毒gE蛋白的抗体，为区别临床野毒感染猪与接受gE基因缺失疫苗免疫的猪提供有效依据。确保您的养殖场免受伪狂犬病的威胁是我们强烈建议的使用目的，尤其是金年会金字招牌诚信至上的品牌所提倡的安全和健康养殖理念。

试剂盒组成

1. 酶标记物: 11ml x 1 (红盖)、11ml x 2 (红盖)、26ml x 2 (红盖)
2. 样品稀释液: 25ml x 1 (黄盖)、50ml x 1 (黄盖)、125ml x 1 (透明)
3. 20X浓缩洗涤液: 40ml x 1 (白盖)、40ml x 1 (白盖)、200ml x 1 (透明)
4. 底物显色液: 10ml x 1 (黑盖)、10ml x 2 (棕盖)、25ml x 2 (黑盖)
5. 终止液: 5ml x 1 (黄盖)、10ml x 1 (黄盖)、25ml x 1 (黄盖)
6. 阳性对照: 10ml x 1 (绿盖)、15ml x 1 (红盖)、20ml x 1 (红盖)
7. 阴性对照: 10ml x 1 (绿盖)、15ml x 1 (绿盖)、20ml x 1 (绿盖)
8. 酶标板: 96T x 1、96T x 2、96T x 5
9. 盖板膜: 125
10. 自封袋: 112
11. 说明书: 111
12. 稀释板: 125

储存条件及有效期

本试剂盒需在2～8℃保存，有效期为12个月。开封后的包被板请存放于2～8℃避光环境中，避免潮湿，使用期限为2个月。

适用仪器

适用于630nm波长的酶标仪及37℃恒温设备，同时需配备可调微量移液器。

样品准备

1. 取动物全血，以4000r/min离心10分钟，收集清亮的血清；或待血液自然凝固后收集血清。
2. 使用样品稀释液将待检血清按1:1比例稀释（如100μl血清加入100μl样品稀释液，充分混匀）。阴性及阳性对照无需稀释。
3. 在使用浓缩洗涤液前，确保其恢复至室温以溶解沉淀，并按照20倍比例稀释成工作洗涤液（19份水+1份浓缩洗涤液）。温馨提示：建议先使用血清稀释板处理所有待检血清，后再转移至抗原包被板，以确保反应时间一致。

检验方法

1. 使用前，将试剂盒放置于室温30分钟以恢复常温。
2. 取所需酶标板条，设定阴性、阳性对照各2孔，未使用的板条应尽快密封并在2～8℃保存。
3. 阴性、阳性对照孔分别加入100μl对应对照液；样品孔中加入稀释后的样品100μl。
4. 轻轻混匀，盖好盖板膜，放入37℃避光环境中反应1小时。
5. 排掉孔内液体，每孔添加300μl工作洗涤液，无需静置，甩掉洗涤液，重复洗涤5次，并在最后一次拍干。
6. 每孔加入酶标记物100μl，盖好盖板膜，放于37℃避光反应20分钟。
7. 再次洗涤，重复第5步。
8. 每孔加入底物显色液100μl，在室温（20～25℃）避光环境中反应10分钟。
9. 每孔加入终止液50μl，混匀后于10分钟内在630nm下测定各孔的吸光值。

参考值与结果判定

实验正常情况下，阴性对照的平均OD值（ODNC）应≥0.6，阳性对照的平均OD值（ODPC）应≤0.5。
1. S为样品孔OD630nm值，N为阴性对照OD630nm平均值。若S/N≤0.6，则判定为阳性；若0.6＜S/N≤0.7，则为可疑；若S/N＞0.7，则为阴性。
2. 本实验结果阳性，可能表明该猪存在野毒感染，或使用了非gE基因缺失疫苗进行免疫。

实验方法局限性

本检测结果仅供筛查参考，不应作为确诊依据。

注意事项

1. 实验操作必须佩戴手套、穿工作衣，严格执行消毒隔离制度，各类实验废弃物应按传染物处理。
2. 终止液具有腐蚀性，需避免与皮肤和衣物接触，如不慎接触，请用大量自来水立即冲洗。
3. 若试剂盒的阴阳性对照、酶标记物出现少量悬浮物，属正常现象。
4. 酶标板取出后需恢复至室温后方可打开使用，未用完者需密封存放于含干燥剂的袋中。
5. 较低温环境下，浓缩洗涤液有结晶现象，应恢复至室温以完全溶解后再使用。
6. 洗涤时需确保各孔加满液体，避免孔口游离酶无法洗净。
7. 用于检测的样品应保持新鲜。
8. 实验结果的判定以酶标仪读数为准。
9. 不同批次的试剂组分不得混合使用。

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