金年会金字招牌诚信至上提供SV40转染人成骨细胞HFOB119的详细培养说明，旨在帮助科学家和研究人员有效地进行细胞培养和实验。

一、细胞培养条件

细胞名称：SV40转染人成骨细胞HFOB119
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：DMEM/F12 + 0.3 mg/ml G418 + 10% FBS
传代方法：第一次建议1:2传代，传代情况如发生变化，2天后换液。
备注：用无菌离心管收集培养基作为对比，若对比效果不佳，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞收到后处理

收到细胞后，应将其培养至良好状态，并填满完全培养液，封好瓶口以确保细胞的安全转运。处理前，用75%酒精消毒整个细胞瓶，然后在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶置于35℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。建议使用显微镜观察细胞的生长情况，并对不同倍数进行拍摄保存，前三天的图像将作为重要售后依据。如未提供照片，默认为状态良好（建议在传代后分别用原瓶完全培养基和自调配的完全培养基以便进行对比培养）。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代：若细胞汇合度未超过80%，收集培养液至离心管中，保留5ml用于培养；如超过80%，进行传代：

1. 弃去培养上清，用无钙镁PBS润洗1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml于培养瓶中，置于35℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态；当细胞大部分变圆并脱落时，迅速回到操作台，轻敲瓶底后加入5ml完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞至完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新鲜完全培养基至5-8ml/瓶后，放置于35℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存：

1. 细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液，PBS清洗一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液，待细胞回缩后加5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打脱落，转移至离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃上清，加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后装入冻存管中。
4. 将冻存管直接放入-80℃冰箱，如需转入液氮罐，需先在-80℃存放24小时以上。

c. 细胞复苏：

1. 从液氮中取出冻存管，迅速放入35℃水浴中解冻，直至无结晶，用75%酒精擦拭外壁。
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃上清，重新用5ml完全培养基重悬细胞，并接种至T25培养瓶，放入35℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞粘附性较差，运输过程中可能会脱落，属正常现象。如脱落较多，可将培养液收集至离心管中，离心后重悬并依相应方法进行传代。

五、售后条款

1. 细胞问题的重发情况：

1. 运输过程中若遇到细胞丢失、瓶子破损等问题，予以重发。
2. 细胞污染需在收到48小时内提供真实实验结果，核实后重发。
3. 常温发货的细胞若在静置24小时后，干冰发货的复苏细胞未存活，需提供清晰的细胞状态照片，方可重发。
4. 在收到后的3天内需拍照，否则视为产品合格。

2. 不予重发的情况：

1. 客户造成的细胞污染。
2. 客户不当操作导致细胞状态不佳。
3. 非推荐的培养体系导致细胞状态问题。
4. 未提供细胞前3天的照片。

使用金年会金字招牌诚信至上的产品和服务，确保您的科学研究顺利进行，取得优异的实验结果。