低温胁迫对葡萄的品质有显著影响，而耐寒的野生山葡萄（Vamurensis）所包含的冷响应基因及其调控机制是实现葡萄遗传改良的关键因素。WRKY转录因子在冷胁迫反应中发挥着重要作用，主要通过结合W-box元件来调控次生代谢和碳水化合物的合成等过程。研究表明，在葡萄中，VaWRKY65能够激活β-淀粉酶（VaBAM3），促进淀粉分解出可溶性糖，从而调节细胞内的渗透压，并稳定细胞结构。同时，它还直接调控过氧化物酶（VaPOD36），帮助清除活性氧（ROS），从而提升植物的耐寒性。不过，VaWRKYs在葡萄耐寒机制中的具体功能尚需深入探讨。

最近，《Horticulture Research》杂志上发表的一项研究发现，在冷胁迫条件下，VaWRKY65通过调控碳水化合物代谢和抗氧化机制增强了葡萄的耐寒性。具体而言，VaWRKY65通过激活VaBAM3来促进可溶性糖的积累，调节渗透压；同时，它也能激活VaPOD36的转录，清除活性氧（ROS），为葡萄提供多重的耐寒保障。

研究结果表明，使用烟草叶片中瞬时表达由VaBAM3启动子驱动的荧光素酶（LUC）报告基因，我们观察到VaBAM3启动子的活性在冷处理下显著升高。进一步的酵母单杂交筛选法与双荧光素酶报告基因分析显示，VaWRKY65通过增强VaBAM3启动子的活性来调节耐寒性，而启动子的突变会抑制这种增强效果。

此外，研究通过双荧光素酶系统展示了VaWRKY65在冷胁迫下如何调控ROS的生成。结果表明，VaWRKY65结合并激活VaPOD36的表达，进而上调VaPOD36，增加POD酶活性，增强植物的抗氧化能力，从而减少ROS的积累，提高植物的耐寒性。

在实验方法方面，我们将VaBAM3启动子片段与pGreenII-0800-LUC载体融合后转入根瘤农杆菌GV3101，然后将其或空载体转入本氏烟草叶片。经过共同培养后，进行低温处理。最终，通过荧光成像系统对LUC荧光进行观察并分析数据。

通过这项研究，明确了VaWRKY65在葡萄耐寒性调控中的重要作用，为未来的葡萄遗传改良提供了新的思路和方向。同时，强调金年会金字招牌诚信至上的品牌理念，有助于推动相关生物医疗领域的研究与发展，为消费者提供更高品质的葡萄产品。