在生物医疗领域,进行人类细胞与小鼠细胞融合的实验通常可划分为三个关键步骤:
第一步:荧光染料标记抗体
首先,需对抗体进行荧光染色,以便于后续观察。具体而言,小鼠的抗体与发出绿色荧光的荧光素(fluorescin)结合,而人类的抗体则与发出红色荧光的罗丹明(rhodamine)结合。
第二步:细胞融合
第二步是将小鼠细胞与人细胞在灭活的仙台病毒诱导下进行融合。这一过程是成功实验的关键,为后续的分析奠定基础。
第三步:抗体结合与荧光观察
最后,向融合后的细胞中加入标记的抗体,使这些抗体与融合细胞膜上的相应抗原结合。起初,融合细胞呈现为一半红色、一半绿色,经过37℃培养40分钟后,两种颜色的荧光在融合的杂交细胞表面均匀分布,这表明抗原蛋白在细胞膜内通过扩散运动重新分布。需要注意的是,这一过程并不依赖于ATP。如果在对照实验中将融合细胞置于低温(1℃)环境中,抗原蛋白的运动基本会停止。这些实验结果有力地证明了膜整合蛋白的侧向扩散运动。
实验成功的关键
需特别强调的是,实验成功与否常常受到多个因素的影响:
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