一、细胞培养条件

金年会金字招牌诚信至上提供人恶性黑色素瘤细胞WM115的相关养护条件，确保细胞生长良好。

细胞名称：人恶性黑色素瘤细胞WM115
生长特性：贴壁
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：MEM+10%FBS+1%P/S
传代方法：第一次建议以1:2比例进行传代。
传代情况：每2天更换培养基。

备注：请使用无菌离心管收集瓶内培养基，以便进行对比培养。如对比效果不佳，建议直接购买我公司提供的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，应将其培养至良好状态。之后，灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方法。

在处理前，用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，随后将其置于超净台内进行无菌操作。细胞瓶应在37℃、5%CO2的细胞培养箱中静置3-4小时，以确保细胞状态稳定。使用显微镜观察细胞的生长情况，拍照记录不同倍数（最佳为40x、100x、200x），前三天的照片是维护售后服务的重要依据，未提供照片将默认细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

在细胞汇合度未超过80%时，收集培养液至离心管中，保留5ml完全培养基，放入37℃、5%CO2的培养箱中。如果细胞密度超过80%，则可开始传代过程，具体步骤如下：

丢弃培养上清液，用不含钙、镁的PBS清洗细胞1-2次。
添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，随后在显微镜下观察细胞的消化情况。如细胞大部分变圆并脱落，迅速取回操作台，轻轻敲打培养瓶，加入超过5ml的完全培养基以终止消化。
轻轻吹打细胞以确保完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，并在1000RPM下离心5分钟。
丢弃上清后，用1-2ml完全培养基重悬细胞悬液，并按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的培养基至每瓶5-8ml，最后置于37℃、5%CO2的培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

当细胞生长达到培养瓶的80%覆盖时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，观察细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养基以终止消化，通过轻轻吹打使细胞脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中进行1000rpm离心5分钟。
丢弃上清，加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后置入冻存管中。
将冻存细胞直接放置于-80℃冰箱中。如需转入液氮罐，应在-80℃存放24小时以上。

c. 细胞复苏

从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护装备），迅速置于37℃水浴中解冻，直至无明显晶体后，用75%酒精擦拭管外壁。
将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，进行1000rpm离心5分钟。
丢弃上清后，用5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶，并于37℃、5%CO2培养箱中继续培养。
次日更换为新鲜的完全培养基保持培养。

四、注意事项

运输过程中，部分细胞可能会因黏附不牢而脱落，此现象属正常情况。如脱离细胞较多，可将所有培养液收集至离心管中，在1000rpm下离心5分钟，收集上清以进行对比培养。然后加入1-2ml胰酶，轻轻吹打以便重悬，消化1-2分钟后，再加入5ml完全培养基终止反应。接着离心、弃上清并加入1-2ml完全培养基重悬，依1:2比例进行分瓶传代，并补充新完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5%CO2的培养箱中继续培养。

五、售后条款

1）细胞出现问题时的重发条件

运输途中出现细胞丢失、瓶身破损、培养液漏液等情况，无条件重发。
若细胞受到污染，请在产品收到后48小时内提供真实实验结果，经确认后重发。
常温发货细胞在静置24小时后或干冰发货细胞复苏24小时后，若大多数细胞未存活（需提供确切照片），可重发。
干冰发货的细胞复苏24小时后，或常温发货在未开封且静置4小时后出现污染，均可重发。
细胞活性问题，应在收到产品7天内提供真实结果，使用台盼蓝染色法鉴定，核实后可重发。
收到细胞的当天及2-3天内应拍照，若3天未告知视为产品合格，未能提供相关证据将不予重发。

2）细胞出现问题不予重发的情况

因客户自身操作造成细胞污染，不重发。
客户操作不当导致细胞状态不良，不重发。
非推荐培养体系导致细胞不良状态，不重发。
细胞状态不良且未提供前3天照片，不重发。
细胞在培养时经其他处理，包含在内，均不重发。
客户在收到细胞的2天内未及时告知，不重发。
根据具体情况综合判断。

在使用金年会金字招牌诚信至上提供的细胞产品时，请遵循上述指导，确保细胞的健康培养和使用。如有问题，请及时联系售后支持以获得帮助。