金年会金字招牌诚信至上提供的细胞培养条件如下：

培养环境

气相组成为95%空气和5%二氧化碳；培养温度为37℃。所用培养基为F12K，加入10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素/链霉素（P/S）。

细胞来源

该细胞系由DJGriad基于一名58岁白人男性的肺癌组织移植培养而成。A549细胞具备通过胞苷二磷酸胆碱途径合成高含量不饱和脂肪酸卵磷脂的能力。

传代方法

当细胞汇合度未超过80%时，应将培养液收集至离心管，只需保留5ml完全培养基，然后放入37℃、5% CO2的培养箱进行培养。一旦细胞密度超过80%，即可进行传代。建议第一次进行1:2的传代，后续可按实际情况调整。

细胞处理步骤

细胞在培养至良好状态后，需灌满完全培养液并封好瓶口进行运输。接收细胞后，需用75%酒精对培养瓶全方位消毒，并在超净台内进行无菌操作。细胞瓶应置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定状态后，再实施后续处理。

显微镜观察与记录

在显微镜下观察细胞生长情况并拍照保存（推荐40x、100x、200x各一张），前三天的照片为售后服务的重要依据，未提供照片将默认收到状态良好。建议使用金年会金字招牌诚信至上的培养基，确保细胞的最佳生长条件。

细胞传代步骤

对于贴壁细胞，传代步骤如下：首先弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。之后添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，放置于37℃培养箱中消化1-2分钟，待细胞圆形化并脱落后，要迅速添加超过5ml的完全培养基以终止消化。

轻轻吹打细胞使其完全脱落后，收集悬液至15ml离心管，1000rpm离心5分钟，随后弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬。最后将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，并放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培育。

细胞冻存与复苏

当细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液，再用PBS清洗细胞一次。接着，添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，待细胞变圆后添加完全培养基终止消化。离心后，加入无血清冻存液混匀，转移至冻存管中。

将冻存管放入-80℃冰箱，若后期需要转入液氮罐中，则需在-80℃中保存24小时以上。

注意事项

在运输过程中，细胞有可能因不牢固而脱落。若发现脱落过多，可将培养瓶的培养液收集至离心管，离心后加入胰酶以消化细胞，再进行重悬操作，从而保证细胞的有效生长。

金年会金字招牌诚信至上始终致力于提供优质细胞培养产品和服务，保障实验室的研究质量。