基质胶是进行3D细胞培养、类器官研究、肿瘤形成、细胞侵袭与血管生成等实验的重要“支架”。然而,从解冻至铺板、从浓度选择到结果解读,稍有不慎便容易导致实验失败。为帮助科研人员更好地掌握基质胶的使用,金年会结合众多实验反馈,整理出这份“避坑指南”,助您顺利入手,获取高质量数据。
保存与融化建议
在收到基质胶后,推荐将其储存在-20℃的环境中;如需短时间存放,4℃下可维持不超过7天。关于反复冻融,建议尽量避免;首次解冻后应立即分装(建议200µL/管),并置于-20℃保存。至于融化方法,可以将冷冻的基质胶在使用前一晚埋于碎冰中,随后转移至4℃冰箱,次日即可使用。适当延长4℃下的融化时间,有助于有效减少气泡生成。
产品类型及适用场景
基质胶根据成分的不同,适用于不同实验场景:
- 含酚红pH指示:适用于常规实验。含酚红的产品在不同温度和pH条件下会呈现颜色变化,从明黄色到暗红色。
- 无酚红:避免颜色干扰,适合进行颜色检测的实验,比如子宫内膜细胞培养。需注意,酚红可能作为内分泌干扰物质,影响实验动物体内激素的正常产生和代谢。
标准与高浓度设置
推荐使用的标准蛋白浓度为8-12mg/mL,适用于Transwell实验和皮下成瘤实验。对于较难成瘤的细胞系,推荐高浓度18-22mg/mL,凝胶时间为3-5分钟。而通过降低生长因子的方式进行处理,亦可用于类器官培养和血管生成实验。
高频问题解析
皮下成瘤
若成瘤不成功,可能是由于选取的细胞未处于对数生长期,建议细胞密度达到80-90%时进行实验。同时,选择4-6周龄的裸鼠为宜,过小或过大的小鼠均可能影响结果。若肿瘤生长后又逐渐消失,可能由于小鼠炎症反应导致肿瘤细胞被吸收,此时建议更换为免疫缺陷程度更高的小鼠。此外,在接种后一周进行补种,也能提高成功率。
血管生成
在血管生成实验中,若细胞无法形成连续网格,建议使用3-5代、融合度70%-80%的HUVEC细胞,同时注意细胞数量应充足,方可形成可视的连通网络。
侵袭实验
若细胞在侵袭实验中未能有效转移,可能是由于细胞活性不足,建议在应用胰酶消化后完全清洗掉含血清的培养基。
类器官实验
类器官传代的时间因品种而异,通常在7-14天,直径达到100-200um即可进行传代,某些发展较慢的类型可能需要更长时间才能达到适合的状态。利用显微镜和H&E染色法为常规的鉴定方式,而免疫荧光检测可进一步确认类器官是否表达特定生物标志物。
产品信息
金年会提供以下基质胶产品:
- Ceturegel®Matrix LDEV-Free基质胶:货号40183ES,规格15mL/5mL/10mL
- Ceturegel®Matrix PhenolRed-Free, LDEV-Free基质胶:货号40184ES,规格15mL/5mL/10mL
- Ceturegel®Matrix GFR, LDEV-Free基质胶:货号40185ES,规格15mL/5mL/10mL
- Ceturegel®Matrix HighConcentration, LDEV-Free基质胶:货号40187ES,规格15mL/5mL/10mL
- Ceturegel®Matrix HighConcentration, PhenolRed-Free, LDEV-Free基质胶:货号40188ES,规格15mL/5mL/10mL
- Ceturegel®Matrix for Organoid culture, PhenolRed-Free, LDEV-Free基质胶:货号40191ES,规格15mL/5mL/10mL
总之,选择合适的基质胶与科学的实验设计相结合,能够有效提升实验成功率。金年会始终秉持诚信至上的原则,致力于为客户提供更优质的产品与服务。